Histologic and inflammatory lamellar changes in horses with oligofructose-induced laminitis treated with a CXCR1/2 antagonist / Alterações histológicas e inflamatórias no tecido laminar de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofrutose e tratados com um antagonista para CXCR1/2

With the hypothesis that blocking chemokine signaling can ameliorate acute laminitis, the aim was to evaluate the therapeutic effect of intravenous DF1681B, a selective antagonist for CXCR1 and CXCR2 (chemokine receptors), in an oligofructose equine laminitis model. To twelve mixed breed clinically healthy hoses with no previous history of hoof-related lameness was administered oligofructose (10g/kg given by nasogastric tube) and divided into two groups: treated (intravenous DF1681B at 30mg/kg 6, 12, 18, and 24h after oligofructose) and non-treated groups. Laminar biopsies were performed before and 12, 36, and 72h after administering oligofructose. Samples were stained with periodic acid-Schiff (PAS) and scored from 0 to 6 according to epidermal cell and basal membrane changes. The IL-1β, IL-6, and CXCL1 RNA expressions were determined by RT-PCR. Parametric and non-parametric tests were used to compare times within each group (P<0.05). The PAS grades and IL-1β and IL-6 RNA expression increased in the non-treated group, but remained constant in the treated horses. In conclusion, DF1681B therapy reduced laminar inflammation and epidermal deterioration in treated horses. CXCR1/2 blockage should be considered therapeutically for equine acute laminitis.

A expressão de quimiocinas e a infiltração de leucócitos no tecido laminar são característicos de laminite aguda de equinos. O presente estudo avaliou o efeito terapêutico da administração intravenosa de DF1681B , um antagonista seletivo para CXCR1 e CXCR2 (receptores de quimiocinas), em um modelo de laminite equina por oligofrutose. Utilizaram-se doze cavalos sem raça definida, compreendendo quatro machos e oito fêmeas não gestantes, com idade (média ±SD) 7±3,5 anos, pesando 305±35kg e com uma pontuação média de condição corporal de 5±1/9. Os indivíduos elegíveis eram clinicamente saudáveis, sem história prévia de claudicação relacionados ao casco. Após administração de oligofrutose (10g/kg por sonda nasogástrica), os animais foram divididos em dois grupos: tratado (30mg/kg de DF1681B intravenosa, 6, 12, 18 e 24h após a oligofrutose) e não tratado, que recebeu placebo. Biópsias laminares foram realizadas antes e 12, 36 e 72h após a administração de oligofrutose. As amostras foram coradas com ácido periódico de Schiff (PAS) e classificadas de 0-6 de acordo com alterações nas células epidérmicas e na membrana basal. Também determinaram-se as expressões gênicas de IL-1β, CXCL1 e IL-6 por RT-PCR. Testes paramétricos e não paramétricos foram utilizados para comparar os momentos em cada grupo (P<0,05). Estatisticamente, os graus PAS e as expressões de IL-1β e IL-6 se elevaram após a indução no grupo não tratado, mas se mantiveram constantes nos cavalos tratados. Em conclusão, a terapia por DF1681B reduziu a inflamação laminar e a deterioração epidérmica em equinos submetidos ao modelo de intoxicação por oligofructose. O bloqueio de receptores CXCR1/2 deve ser considerado como uma opção terapêutica para prevenção da laminite aguda de equinos.

Hydrocortisone decreases apoptosis in jejunum of horses subjected to experimental ischemia and reperfusion / Hidrocortisona diminui a apoptose no jejuno de equinos sujeitos a isquemia e reperfusão experimentais

In order to evaluate the effect of hydrocortisone on apoptosis in the jejunum of horses subjected to ischemia and reperfusion, ten horses were paired and grouped into two groups - treated (n=5) and non treated (n=5). Segments of the jejunum were used as controls (C), or as venous ischemia (VIsc), which were subjected to 2h of ischemia followed by 2 or 12h of reperfusion. C samples were collected at time zero (prior to ischemia) and VIsc samples were collected at 2h of ischemia and at 2 and 12h of reperfusion. TUNEL positive apoptotic cells were counted in 10 microscopical fields in deep mucosa from each horse throughout the time course. After 12h of reperfusion, the number of apoptotic cells in treated group were significantly lower than in untreated animals, indicating that hydrocortisone inhibits apoptosis. These results indicate that hydrocortisone has a beneficial effects favoring the maintenance of jejunal integrity in horses with ischemia and reperfusion injuries by preventing apoptotic cell death.

Com o objetivo de avaliar o efeito da hidrocortisona sobre a apoptose no jejuno de equinos submetidos à is-quemia e reperfusão, dez cavalos foram agrupados em dois grupos: tratado (n=5) e não-tratado (n=5). Foi utilizado um segmento do jejuno como controle (C) e outro foi submetido a isquemia venosa (VIsc) por 2h seguida de 2 ou 12 h de re-perfusão. Amostras de C foram coletadas no tempo zero (antes da isquemia) e amostras de VIsc foram coletadas após 2h de isquemia e a 2 e 12h de reperfusão. Células apoptóticas TUNEL positivas foram contadas em 10 campos microscópicos da mucosa na região das criptas de cada animal em cada tempo. Após 12h de reperfusão, o número de células apoptóticas no grupo tratado foram significativamente menores do que no grupo não-tratado, indicando que a hidrocortiso-na inibe a apoptose. Esses resultados mostram que a hidro-cortisona tem efeito benéfico favorecendo a manutenção da integridade do jejuno em cavalos com lesão de isquemia e reperfusão por prevenir a morte celular por apoptose.

Alterações morfométricas no plexo mioentérico do cólon menor equino distendido experimentalmente / Morphometrical alterations in myoenteric plexus of experimentally distended equine small colon

O cólon menor dos equinos é frequentemente acometido por afecções obstrutivas, sendo a disfunção da motilidade uma complicação comum após o tratamento cirúrgico. Este transtorno pode estar relacionado com lesões no plexo mioentérico ocorridas durante a distensão intestinal, contudo pouco se sabe sobre sua fisiopatologia. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações morfológicas na inervação mioentérica em segmentos de cólon menor de eqüinos submetidos à distensão intraluminal com pressão suficiente para promover redução da perfusão microvascular (isquemia parcial) da parede intestinal. Nove eqüinos foram submetidos à distensão do cólon menor por 4h. Fragmentos da parede intestinal foram colhidos antes e ao final da distensão, após 1,5 e 12 horas de reperfusão no segmento experimental e ao final do procedimento em segmento distante. As amostras foram fixadas e processadas rotineiramente e secções histológicas foram coradas com cresil violeta para a morfometria. Por meio de um software de análise de imagens, obtiveram-se a área, o perímetro e os diâmetros mínimo e máximo do corpo neuronal, do núcleo e do nucléolo dos neurônios e as áreas do citoplasma e do nucleoplasma. Verificou-se redução significativa (P<0,05) das áreas do corpo neuronal e do citoplasma ao final da distensão, retornando aos valores equivalentes aos iniciais durante a reperfusão. Conclui-se que a distensão intraluminal alterou morfologicamente os neurônios do plexo mioentérico. Essas modificações morfológicas podem estar associadas e contribuir para explicar a disfunção da motilidade freqüentemente observada em casos clínicos.

The equine small colon is frequently affected by obstruction, and intestinal motility dysfunction is a common complication after its surgical treatment. This fact may be related to myoenteric plexus lesion caused by distention; however, little is known about the pathophysiology of this condition. The objective of this study was to evaluate the morphological alterations in the myoenteric inervation of segments of small colon of horses subjected to intraluminal distension with reduction of the microvascular perfusion (partial ischemia) of the intestinal wall. Nine horses were used to promote distension of on segment of small colon for 4 hours. Samples of intestinal wall were collected before and at the end of the distension, after 1.5 and 12 hours of reperfusion in the experimental segment and at the end of the procedure in a different distant segment. Samples were processed and histological sections were stained with cresyl violet for the morphometric studies. An image analyzer software was used to measure perimeter, diameter, and area of the neuronal body, nucleus and nucleolus of the neurons and the areas of the cytoplasm and nucleoplasm. Significant reductions (P<0.05) in the areas of the neuronal body and cytoplasm were detected at the end of intestinal distension, returning to the basal values during the reperfusion. In conclusion, intraluminal distension promoted changes in the morphology of the neurons of myoenteric plexus. These morphological modifications may be associated to the motility dysfunction frequently observed in clinical cases.

Concentrações plasmáticas de triptamina, tiramina e feniletilamina em eqüinos sob efeitos de sobrecarga de carboidratos e antiinflamatórios não esteroidais / Plasmatic concentrations of tryptamine, tyramine end phenylethylamine in horses under the effect of carbohydrate overload and non-steroid antinflammatory compounds

As concentrações plasmáticas das aminas triptamina (TRP), tyramina (TYR) e pheniletilamina (PEA) foram determinadas por cromatografia gasosa (CG) de 20 eqüinos sob efeito de sobrecarga por carboidratos (SC). Após 36h da SC os animais foram aleatoriamente divididos em quatro grupos (n=5) e receberam a cada 12h por via iv: solução salina 10mL (GC), ketoprofeno 2,2mg/kg (GK), fenilbutazona 4,4mg/kg (GF) e flunixin meglumine 1,1mg/kg (GFM). As concentrações das aminas TYR e PEA variaram de 0,18 a 164,2mg/L, com diferenças nos tempos avaliados, mas não entre os tratamentos (p<0,01). A concentração plasmática de TRP apresentou diferenças entre os tempos e também entre os tratamentos. O GC diferiu dos demais nos momentos 48h e 60h e as concentrações nos grupos GK e GFM foram menores que nos grupos GF e GC às 72h (P= 0,0012). Conclui-se que nas doses utilizadas os antiinflamatórios não esteroidais avaliados não interferem nas concentrações de TYR e PEA. Entretanto, o ketoprofeno e o flunixin meglumine foram efetivos em diminuir a concentração plasmática de TRP.

The concentrations of the bioactives amines tryptamine (TRP), tyramine (TYR) and phenylethylamine (PEA) were determined by gas chromatography in plasma samples of 20 horses submitted to carbohydrate overload. Thirty hours after the overload, the horses were randomly distributed in four groups (n=5) and were submitted to four IV treatments every 12 hours: 10ml of saline (GC), ketoprofen 2.2mg/kg (GK), phenylbutazone 4.4mg/kg (GF), and flunixin meglumine 1.1mg/kg (GFM). Blood samples were collected at various times after the overload (0-72 h). Plasma TYR and PEA concentrations ranged from 0.18 to 164.2mg/L, and differed significantly with time (p<0.01), but did not differ in the treatments. Plasma concentrations of TRP differed between times and treatments. The GC was significantly major than other treatments at 48h and 60h after the overload, and the plasma concentration of TRP in groups GK and GFM was significantly lower than in groups GF and GC at 72 h (p=0.0012). We concluded that the anti-inflammatory drugs evaluated do not interfere in the plasma concentration of TYP and PEA. For TRP, ketoprofen and flunixin meglumine was effective to reduce de plasmatic concentration of this amine.

Avaliação histomorfométrica e ultra-estrutural da mucosa do cólon menor eqüino submetido a distensão / Histomorphometric and ultrastructural evaluation of the mucosa of the equine small colon subjected to distention

Estudos recentes demonstraram que a distensão luminal do cólon menor, apesar de ter promovido redução da irrigação da camada seromuscular resultando em inflamação intensa, não acarretou em lesões histopatológicas aparentes na mucosa. O objetivo do presente estudo foi avaliar, por meio de histomorfometria e microscopia eletrônica de varredura (MEV), os efeitos da distensão intraluminal sobre a mucosa do cólon menor. Utilizaram-se 16 eqüinos. No Grupo distendido (GD), nove deles foram submetidos a quatro horas de distensão intraluminal do cólon menor por um balão inflado com pres são de 40mm de Hg. No Grupo instrumentado (GI), o balão foi introduzido no lume, mas sem provocar distensão. Colheram-se amostras intestinais antes e ao fim da obstrução e após 1,5 e 12 horas de reperfusão. À MEV observou-se em GD que a superfície da mucosa adquiriu um aspecto liso, aplainado, após a distensão, retornando ao aspecto rugoso após descompressão. Ao fim do experimento, a superfície da mucosa se apresentava com aspecto um pouco mais irregular, com pontos de fragmentação. À histomorfometria observou-se em GD uma redução da espessura da mucosa em relação ao controle após a distensão, retornando a valores semelhantes aos basais após descompressão. Concluiu-se que a mucosa, apesar de ter seu aspecto alterado e sua espessura reduzida, conseguiu suportar a distensão promovida pelo aumento de pressão intraluminal, retornando às suas características originais sem apresentar lesões significativas.

Recently it has been shown that experimental distention of the small colon of horses promotes reduction of microvascular circulation and inflammation of the seromuscular layer associated with neutrophil accumulation in the lungs. However this model was not sufficient to induce evident histophatological changes in the mucosal layer. The aim of this study was to evaluate the mucosa subjected to that model of small colon distention by histomorphometry and scan electronic microscopy (SEM). Sixteen horses were used. In the distended group (DG), nine of them were subjected to distention of the small colon by a surgically implanted intraluminal balloon that was inflated with a pressure of 40mm Hg during 4 hours. In the sham-operated group (SG), the balloon was implanted but not inflated. Full-thickness intestinal samples were collected before and after obstruction and after 1.5 and 12 hours of decompression. By SEM, it was observed that the mucosa turned flat and smooth after distention and returned to the wrinkled original appearance after decompression. Twelve hours after decompression the mucosa had a more irregular appearance with points of fragmentation. There was a reduction in mucosa thickness after distention, returning to basal values after decompression. Instead of the fact that there were changes in appearance and thickness, it was concluded that the mucosa could borne up the compression caused by distention returning to the original characteristics without major lesions.